GST（谷胱甘肽巯基转移酶）能特异的与谷胱甘肽结合，表现为酶和底物的作用原理。利用这个原理，将GST做成标签表达出融合蛋白，与带谷胱甘肽配基的亲和介质特异性结合，从而纯化出目标蛋白，再用特异性的酶将GST标签切除而最终得到天然蛋白。

GST融合蛋白纯化的特点有：纯度高、纯化条件温和、保持蛋白活性、促进蛋白可溶性表达，且该标签可以被切除。

而在纯化过程中偶尔也会遇到一些常见问题，下面就针对GST标签蛋白纯化中常遇到的问题——GST标签蛋白不能被高效的洗脱，进行梳理和解答。通常情况下，GST纯化使用的缓冲液成分如下图所示：

可能的原因1：

洗脱缓冲液的体积或者洗脱时间不够。

建议：

增加洗脱缓冲液的体积。有些情况下，尤其是柱上酶切标签蛋白时，需要更大体积的缓冲液来洗脱标签蛋白。或通过降低洗脱过程中的流速来增加洗脱时间。对于离心方法，可以尝试降低洗脱过程中的离心速度。

可能的原因2：

洗脱缓冲液的pH过低。

建议：

增加洗脱缓冲液的pH值：将pH增加到8-9会增强洗脱而不用提高洗脱所用谷胱甘肽的浓度。

可能的原因3：

洗脱缓冲液的pH过低。

建议：

增加洗脱缓冲液的pH值：将pH增加到8-9会增强洗脱而不用提高洗脱所用谷胱甘肽的浓度。

可能的原因4：

洗脱缓冲液的离子强度过低。

建议：

增加洗脱缓冲液中的离子强度，在洗脱缓冲液中加入0.1-0.2M的氯化钠也可能会使结果变好。

可能的原因5：

非特异的疏水相互作用导致蛋白和柱材非特异的结合或聚集，从而阻止了标签蛋白的溶解和洗脱。

建议：

向洗脱缓冲液中加入非离子去垢剂。加入1%的TritonX-100或2%的n-octylglucoside可以显著提高某些GST标签蛋白的洗脱。

可能的原因6：

洗脱缓冲液中的谷胱甘肽被氧化了。

建议：

使用新鲜的洗脱缓冲液；加入DTT。

卡梅德生物技术公司专注于提供高效的GST蛋白表达与纯化的一站式服务，旨在满足科研和生物技术行业对于高质量蛋白质的需求。我们的服务包括从基因克隆、载体构建到蛋白的表达和纯化，采用优化的表达系统和纯化技术，确保所获得的GST融合蛋白具有高纯度和良好的生物活性。我们采用先进的层析技术，包括亲和层析、离子交换层析和凝胶过滤，以实现对GST融合蛋白的高效纯化。此外，我们提供全面的质量控制测试，包括SDS-PAGE、Western Blot和活性测试，确保每一批次的蛋白产品都符合客户的严格要求。卡梅德生物不仅提供标准化服务，还能根据客户的特定需求提供定制化解决方案，从而大大加速科研项目和生物药物开发的进程。借助我们的专业知识和技术能力，客户可以便捷地获取到高质量的GST融合蛋白，助力科学研究和产品开发的成功。