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重组蛋白酵母表达服务
重组蛋白酵母表达服务介绍

酵母表达既具有原核表达操作简单、高效、成本低的特点,又兼具了真核表达能够进行蛋白加工折叠和翻译后修饰等优势。重组蛋白既可以分泌形式又可以非分泌形式在酵母系统中表达,且能高水平表达,达到5g/L;外源蛋白基因可以以整合的方式插入到酵母染色体上,随染色体复制而不会丢失;酵母具有真核生物的亚细胞结构,具有糖基化、脂肪酰化、蛋白磷酸化等翻译后修饰加工功能,适合活性蛋白表达,容易实现超高密度发酵。

卡梅德科技拥有丰富的重组蛋白酵母表达服务经验,可以为客户提供多种规模的蛋白发酵服务,配合我们完善的蛋白纯化平台,可以在短时间内为客户提供高质量的重组蛋白产品。卡梅德科技拥有完整成熟的酵母表达系统,从基因合成到酵母蛋白表达纯化提供一站式服务,我们有pPICZaA、pGAPZaA、pPIC9K等多种表达载体以及X33、GS115和酿酒酵母等菌株,同时配备多种蛋白表达纯化方法,可以满足客户不同的蛋白表达需求,为客户定制完整的蛋白表达纯化方案。


酵母表达载体选择

酵母表达载体通常要根据基因的表达目的来进行选择,酵母表达系统载体可分为酵母胞内表达载体和酵母胞外表达载体。酵母胞内表达载体有pGAP系列和pPIC3.5K,酵母胞内表达载体可使目的蛋白在胞内表达,可避免酵母的过度糖基化,适用于在胞浆表达或不含二硫键的非糖基化蛋白,选用酵母胞内表达载体表达水平高但后续的纯化相对复杂;酵母胞外表达载体常见的是pPIC9K,可以使目的蛋白分泌到胞外,纯化相对简单。

卡梅德科技除了提供多种毕赤酵母载体外,还提供酿酒酵母载体,配合大规模发酵,可以提供工业级需求的服务。


酵母表达系统应用场景

 酵母表达系统是一种最经济高效的真核蛋白表达系统,可以成功实现胞内表达或是分泌表达,且其放大培养基相对廉价,培养条件要求不高,适宜工业放大。与哺乳动物细胞表达系统一样,酵母蛋白表达系统能够对所表达蛋白进行例如糖基化、酰基化、脂基化、磷酸基化等保证蛋白天然构象的修饰,可用于制备非常接近天然蛋白的具有高附加值的蛋白原料。利用酵母表达系统人们已经成功地表达了多种生物(包括细菌、真菌、病毒、原生生物、植物、脊椎动物、人类)的许多蛋白质,涉及酶类、蛋白酶体、蛋白酶体抑制物、受体、单链抗体、抗原、调控蛋白等多种蛋白质。在医学领域,酵母表达系统已经成功地应用于基因工程疫苗制备、基因工程药物制备(如抗体药物、蛋白质药物)和蛋白质功能研究等。

蛋白酵母分泌表达步骤和周期
步骤服务内容周期 
酵母表达载体构建

* 密码子优化,基因合成(或基因模板扩增)
* 将目的基因亚克隆至合适的载体 
* 拼接序列验证:测序
* 交付:构建正确的重组表达质粒、菌株及测序原始报告

1-2周
菌株转化

* 选择合适的菌株进行转化
* 培养6-10个阳性克隆进行重组蛋白的诱导表达
* SDS-PAGE检测
* 交付:阳性克隆菌株、表达筛选结果报告 

2周
酵母表达菌株筛选

* 检测重组蛋白表达情况(适用于多拷贝数和高表达菌株)
* 交付:阳性克隆菌株、表达筛选结果报告

2周
菌株表达优化

* 优化培养条件(培养基、菌液OD值、甲醇浓度、诱导温度及时间等),提高目的蛋白的产量

2周
小规模蛋白表达及纯化 

* 1L发酵液纯化表达的重组蛋白并进行SDS-PAGE检测
* 交付:重组蛋白0.02-3mg及纯化报告。纯度>85% 

2-3周
大规模蛋白表达及纯化

80L、130L、250L和500L发酵罐


增值服务

* 通过HPLC,质谱等方法详细检测目标蛋白的质量
* 蛋白质N端测序:PPSQ31(Edman降解法测序仪)

1-2周


酵母表达实验流程

重组蛋白酵母表达服务-卡梅德科技.png

重组蛋白酵母表达服务优势

重组蛋白酵母表达服务优势-卡梅德科技.png

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