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动物基因敲除服务
动物基因敲除服务介绍

模式动物是生物学家通过研究特定动物来揭示普遍生命现象的工具。它们是经过人工培育,遗传背景明确的实验动物。模式动物分为基因修饰和野生型两种,基因修饰动物通过改变DNA序列来培育特定基因型。斑马鱼具有胚胎透明,便于观察、基因操作简便等特点,常用于模拟人类疾病。

条件性基因敲除技术基于Cre/LoxP系统,通过Cre重组酶识别LoxP位点并介导DNA重组,实现特定时间和空间的基因敲除。通过将“loxP floxed”小鼠与Cre转基因鼠杂交,可以在特定组织或细胞中敲除靶基因。

基于CRISPR-Cas9技术,获得基因敲除动物时间大大缩短,只需4-6个月便可获得。其原理是通过显微注射法将Cas9蛋白和sgRNA注射到动物的受精卵中,Cas9蛋白在sgRNA的引导下对目标基因进行切割,引发细胞的DNA修复机制。如果细胞通过非同源末端连接(NHEJ)进行修复,往往会引入插入或缺失突变,导致目标基因功能丧失。随着受精卵的发育,这些突变会传递给后代,从而产生基因敲除动物。

卡梅德科技搭建的动物基因编辑平台,可为客户提供从基因敲除小鼠模型的定制到基因功能研究的全方位服务。此外,平台还提供基因敲除动物的繁殖、饲养、动物免疫、抗体制备、抗体人源化、动物模型构建等系列服务,为科研人员提供一站式的服务。


动物

疾病模型

小鼠

肿瘤(肺癌、胰腺癌、前列腺癌、胃癌、肝癌、结肠癌等)、代谢(肺纤维化、糖尿病模型、肥胖模型)、抑郁症模型;

糖尿病模型、早衰症模型、佝偻病模型、脑出血模型、脊髓胶质瘤模型、脑胶质模型、偏头痛模型、帕金森模型、老年痴呆模型;

糖尿病模型、早衰症模型、佝偻病模型、脑出血模型、脊髓胶质瘤模型、脑胶质模型;


内容

步骤

服务内容

周期

Step1 sgRNA设计

(1)客户提供目标基因;

(2)生信分析,确定靶标位点,根据PAM位点设计靶序列,其末端加上酶切位点;

(3)合成sgRNA序列;

1天

Step2 CRISPR Cas9相关载体构建载体

(1)合成的sgRNA序列拼接到载体上;转化宿主菌,测序验证;

1-2月

Step3 载体共转染细胞

(1)细胞接种;

(2)质粒稀释;

(3)制备质粒-转染试剂复合物;

(4)sgRNA载体、Cas9载体、荧光报告载体共转染细胞;

(5)流式分选单克隆细胞;

咨询

Step4 体外转录

(1)细胞基因组提取;

(2)sgRNA、cas9转录模板制备;

(3)sgRNA、cas9 mRNA体外转录;

1周

Step5 动物细胞超数排卵与显微注射

(1)雌激素、性腺激素素处理雌性动物,收集受精卵;

(2)sgRNA与cas9mRNA混合注射到受精卵细胞质;

咨询

Step6 F0突变检测

1)酶切测序验证突

1周


流程

动物基因敲除实验流程-卡梅德科技.jpg

优势

动物基因敲除服务优势-卡梅德科技.png

常见问题解答

1.动物基因敲除通常使用什么方法?

答:对于动物基因敲除,通常采用受精卵显微注射的方法。将Cas9蛋白和sgRNA混合,通过显微注射到动物的受精卵中。随着受精卵的发育,这些突变会传递给后代,从而产生基因敲除动物。

2.CRISPR Cas9基因敲除技术有哪些优势?

答:操作相对简单,可以快速实现对特定基因的敲除;同时,能够精确控制敲除的基因位点,减少脱靶效应;此外,该技术还具有成本低、实验周期短等优点。

3.如何评估CRISPR Cas9基因敲除实验的成功率?

答:基因组测序,通过测序结果与目标基因序列的对比,可以判断敲除是否成功以及敲除的效率。此外,还可以观察敲除后动物的表型变化来间接评估敲除效果。

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