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动物基因敲入服务
动物基因敲入服务介绍

小鼠是哺乳纲、啮齿目、鼠科的一种小型哺乳动物,是实验室中常用的模式生物之一。其基因组与人类有高度的同源性,大约99%的人类基因在小鼠中有对应的同源基因。因此,研究小鼠基因功能的结果可应用于人类,利用基因编辑技术,能模拟人类疾病于小鼠,创建疾病模型,观察疾病发展和药物效果。

基因敲入技术的核心应用在于构建人类疾病模型。在人类基因组学研究中发现基因单碱基突变或基因的异位是疾病尤其是遗传疾病的根本病因,因此通过基因敲入,将点突变或者外源片段引入目标靶点,可以在体外培养的细胞系或者模式动物中建立疾病模型。

卡梅德(KMD Bioscience)科技凭借在基因工程领域的多年经验,搭建了基于CRISPR/Cas9系统的基因编辑平台,可为客户提供动物基因敲入载体构建服务,包括小鼠、斑马鱼、兔等模式动物。

动物

疾病模型

小鼠

肿瘤(肺癌、胰腺癌、前列腺癌、胃癌、肝癌、结肠癌等)、代谢(肺纤维化、糖尿病模型、肥胖模型)、抑郁症模型;

糖尿病模型、早衰症模型、佝偻病模型、脑出血模型、脊髓胶质瘤模型、脑胶质模型、偏头痛模型、帕金森模型、老年痴呆模型;

糖尿病模型、早衰症模型、佝偻病模型、脑出血模型、脊髓胶质瘤模型、脑胶质模型;


内容

敲入策略:

1.外源基因共表达

外源基因共表达-卡梅德科技.png

2.外源基因替代内源基因表达

外源基因替代内源基因表达-卡梅德科技.png

表1.基于CRISPR cas9系统的基因敲入服务

步骤

服务内容

周期

Step1 sgRNA设计

(1)客户提供目标基因;

(2)生信分析,确定靶标位点,根据PAM位点设计靶序列,其末端加上酶切位点;

(3)合成sgRNA序列;

1天

Step2 CRISPR Cas9相关载体构建载体

(1)合成的sgRNA序列拼接到载体上;转化宿主菌,测序验证;

1-2月

Step3 载体共转染细胞

(1)细胞接种;

(2)质粒稀释;

(3)制备质粒-转染试剂复合物;

(4)sgRNA载体、Cas9载体、荧光报告载体共转染细胞;

(5)流式分选单克隆细胞;

咨询

Step4 体外转录

(1)细胞基因组提取;

(2)sgRNA、cas9转录模板制备;

(3)sgRNA、cas9 mRNA体外转录;

1周

Step5 动物细胞超数排卵与显微注射

(1)雌激素、性腺激素素处理雌性动物,收集受精卵;

(2)sgRNA与cas9mRNA混合注射到受精卵细胞质;

咨询

Step6 F0突变检测

(1)酶切测序验证突变;

1周


流程

动物基因敲入实验流程示意图-卡梅德科技.png

优势

动物基因敲入服务优势-卡梅德科技.png

常见问题解答

1.什么是动物基因敲入?

答:动物基因敲入是一种基因编辑技术,通过该技术可以将外源DNA序列引入到动物细胞的特定基因位点,从而实现新基因的表达或修饰。这种技术有助于研究特定基因的功能和调控机制,以及其对生物体的影响。

2.基因敲入技术有哪些应用?

答:用于构建基因修饰动物模型,模拟人类遗传疾病,从而加深对疾病发生发展机制的理解;研究特定基因的功能和调控机制,以及基因对生物体发育、生理和疾病等方面的影响。

3.如何进行动物基因敲入实验?

答:首先,确定目标基因和敲入位点,并设计合适的敲入策略,包括选择合适的载体、设计同源重组序列等。其次,将构建好的载体导入动物细胞中,利用基因编辑系统造成DNA双链断裂,后通过同源重组修复机制,将外源基因或标签敲入到目标基因位点。最后,对敲入成功的细胞进行筛选和验证,包括PCR、测序等方法确认基因是否准确地敲入到目标位点,以及检测基因的表达和功能。

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