Edman法测定单个氨基酸循环包括3步：第一步是在碱性条件下，PITC与蛋白N端的游离氨基结合；第二步是在酸性溶液中，N端残基被切除；第三步是PITC结合的残基转化成为更为稳定的PTH残基，经过在线的HPLC分析，根据洗脱时间来确定氨基酸种类。

测序步骤：蛋白样品一般先进行SDS-PAGE的分离，保证样品的纯度满足测序的要求；随后将SDS-PAGE上的蛋白样品转移到PVDF膜上；经过染色确定把蛋白条带并切出；Edman测序仪对得到的PVDF膜上的蛋白样品进行分析。测序原理如图1所示：

--蛋白表达及pulldown产物的鉴定：重组蛋白氨基酸序列验证以及各种免疫沉淀蛋白产物的验证

--细胞株表达产物的验证：验证细胞株建立和发酵过程中蛋白产物N端甲硫氨酸和信号肽是否正确处理

--超长氨基酸检测：蛋白质N端长达67个氨基酸测序

--抗体药物N端序列验证

--天然提取，分离纯化的小分子多肽序列鉴定

--实验周期快：2-3周

某种天然纯化小分子多肽样品：蛋白经过冻干处理后复溶调整蛋白浓度至1ug/ul；上样体积50ul

柱信息： C18，流速是0.6ml/min

图3 HPLC分离图谱

图4：N端第1位氨基酸图谱

图5：N端第2位氨基酸图谱

图6：N端第3位氨基酸图谱

图7：N端第4位氨基酸图谱

图8：N端第5位氨基酸图谱