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重组蛋白昆虫表达服务
重组蛋白昆虫表达服务介绍

昆虫细胞表达重组蛋白涉及两代病毒的制备工作,简称为P1和P2代。P1代病毒主要是用于蛋白表达预实验以及扩增P2代病毒,P2代病毒用于大规模蛋白表达制备服务。昆虫细胞蛋白表达系统适合于膜蛋白的重组表达,4次及以下跨膜蛋白几乎可以有效地在昆虫细胞中进行表达和纯化。膜蛋白的纯化是一件比较耗时耗力的事情,卡梅德科技可以提供纯度高达95%的全长膜蛋白定制产品。

昆虫杆状病毒表达系统属于真核表达系统之一,具有外源基因表达水平高、易于表达异源多聚体蛋白、安全性高等特点,重组表达的蛋白产品具有正确的翻译后修饰和生物学活性,如二硫键的形成、磷酸化、糖基化等等。相对于哺乳动物细胞蛋白表达系统,昆虫杆状病毒蛋白表达体系所生产的蛋白,糖基化程度偏低。但是昆虫蛋白表达系统的优势在于,利用病毒进行转染,操作相对容易,转染体系容易形成(相对哺乳动物瞬时转染体系)。卡梅德科技拥有丰富的重组蛋白昆虫表达(昆虫杆状病毒表达)制备经验,可以为您提供高纯度的全长跨膜蛋白产品,同时为客户提供多种规模的蛋白发酵服务,配合我们完善的蛋白纯化平台,可以在短时间内为客户提供高质量的重组蛋白产品。


蛋白表达昆虫宿主细胞系
细胞来源用途
Sf9 * 分离自IPLBSF21-AE* 适于转染、纯化、生产高滴度病毒、铺板以及表达重组蛋白 
Sf21* 衍生于IPLBSF-21细胞系* 转染、纯化、生产高滴度病毒、铺板以及表达重组蛋白。Sf21细胞在一些结构表达方面优于Sf9细胞,如晶体蛋白
Hi5* 源于白菜尺蠖卵巢细胞,粉纹夜蛾细胞 * 适用于重组病毒颗粒表达,也常用于转染和空斑纯化,且Hi5细胞系更适合来表达分泌型重组蛋白
S2* 来源于果蝇晚期胚胎细胞。其中多为雌性四倍体细胞,也有双倍体细胞* 比较适合病毒结构蛋白等重组表达 


重组蛋白昆虫表达服务步骤
步骤 服务内容周期
亚克隆

* 客户不提供基因模板: 密码子优化,基因合成
* 客户提供质粒:扩增并抽提含有目标基因的载体质粒
* 拼接序列验证:测序
*交付:正确构建的重组表达质粒及测序原始报告

2周
P1代病毒制备与表达小试

* 重组Bacmid DNA扩大化培养,并转染昆虫细胞制备P1和P2病毒
* P1代病毒滴度测定(滴度10^6-10^8),并验证小量蛋白表达
* 交付:实验报告与图片

3-4周
表达优化及测试

* P2病毒扩增,病毒滴度测定(滴度10^7-10^9)
* P2代病毒转染昆虫细胞,蛋白表达纯化
* SDS-PAGE及WB分析
* 交付:图片,实验报告,纯化好的蛋白产品

3-4周
大规模重组蛋白表达及纯化

* 1L (默认),5L,10L,30L,80L,130L和250L任选
* 通过亲和,离子交换,疏水及凝胶过滤等多种层析方法纯化表达的重组蛋白
* SDS-PAGE和WB验证蛋白表达

协商


昆虫表达实验流程

重组蛋白昆虫表达服务流程-卡梅德科技.png

重组蛋白昆虫表达服务优势

重组蛋白昆虫表达服务优势-卡梅德科技.png

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