CAR-T（Chimeric Antigen Receptor T-Cell Immunotherapy）疗法就是嵌合抗原受体T细胞免疫疗法。是一种基于肿瘤特异性的细胞疗法，近几年通过优化改良在临床肿瘤治疗上取得很好的效果，是一种非常有前景的，能够精准、快速、高效，且有可能治愈癌症的新型肿瘤免疫治疗方法。由于CAR-T细胞在生物体内通过非MHC限制方式识别杀伤肿瘤细胞，因此在肿瘤治疗方面有较高的应用前景。

传统的CAR由胞外抗原识别区、铰链区、跨膜区、胞内区组成。胞外抗原识别区多为单链片段抗体（single-chain fragment variable, scFv），负责识别肿瘤细胞表面抗原。铰链区与跨膜区起连接作用，有助于稳定scFv与靶抗原稳定结合、传递信号。胞内区主要负责胞内信号转导作用,根据其构造的不同可以大致将CAR分为4代。第1代CAR的细胞内信号转导结构域由CD3ζ或FcRγ的单一结构域组成。第2代和第3代CAR是在CD3分子的近胞膜端加入1个或多个共刺激分子，如CD28、ICOS、CD244等。第4代CAR-T细胞即T cell redirected for universal cytokine killing（TRUCK），其原理是在第2代CAR的基础上加入了细胞因子序列（如IL-12），可以在识别靶抗原后，诱导表达IL-12，从而起到调节局部免疫微环境、募集效应免疫细胞的目的，杀伤逃脱了CAR-T细胞识别的肿瘤细胞。

Nadia Anikeeva等^[1]设计了针对HMW-MAA（黑色素瘤相关抗原）的有特异性CAR（图1），并评估了CD8+CAR-T细胞释放细胞溶解颗粒的效力。结果表明，CAR-T细胞有效地杀死了表达高水平HMW-MAA的黑色素瘤细胞，但并没有杀死表达较低水平HMW-MAA的黑色素瘤细胞。这样的结果表明，需要更高水平的靶向分子来吸引更多的CAR分子，即过量表达的癌症相关分子 。这也为通过免疫疗法来治疗实体瘤提供了有力的基础。

图1 高分子量黑色素瘤相关抗原特异性CD8+CAR-T细胞的制备和检测

肿瘤浸润不良、发展衰竭和抗原不足是限制嵌合抗原受体（CAR）-T细胞功效的常见机制。递送模式识别受体激动剂是改善免疫功能的一种措施；Lexus R. Johnson等^[2]发现一种激活RIG-I/MDA5信号的内源性RNA-RN7SL1，来促进CAR-T细胞的扩增和效应记忆分化（图2）。与其他RNA激动剂不同，RN7SL1在细胞外囊泡中并选择性地转移到免疫细胞中，转移的RN7SL1限制了骨髓源性抑制细胞（MDSC）的发展，减少了骨髓细胞中的TGFB，并促进了具有成本刺激功能的树突状细胞（DC）亚群。因此，内源性效应记忆和肿瘤特异性T细胞也会扩大，从而使CAR抗原丢失的实体瘤产生排斥反应。在内源性免疫力提高的支持下，CAR-T细胞现在可以与RN7SL1共同部署多肽抗原，以提高疗效。这项研究通过RN7SL1激活自身T细胞，以寻找免疫逃逸的癌细胞，以期提高实体瘤的治愈率。

图2 RN7SL1促进CAR-T细胞的扩增和增强内源性免疫功能

来自伦敦大学学院儿童健康研究所的最新研究^[3]显示，他们研发了一种名为CAR-19的新型CAR分子用于治疗急性淋巴细胞白血病（图3）。他们通过一种插入位点条形码的技术来追踪患者体内的不同的CAR-T分子，结果表明，CAR-19在治疗早期（1月）和晚期（>3年）的白血病患者体内表现出强大的扩增性和持久性；同时这种技术还显示T记忆干细胞在介导抗白血病反应及CAR T细胞的长期监控中发挥核心作用。

图3 长效CAR T细胞在产品中和输注后一段时间内患者的免疫表型特征

卡梅德生物建立了完善的细胞生物学平台，可为您提供CAR-T细胞治疗相关的基础研究，卡梅德生物作为为国家级高新技术企业，拥有蛋白定制表达，单、多克隆抗体开发，噬菌体文库构建与筛选、人源scFv抗体发现服务，驼源抗体VHH发现服务以及其他多种物种的scFv抗体发现服务等技术，欢迎广大客户联系我们的工作人员，我们将针对您的项目进行个性化服务。

[1] Na A ,  Sp A ,  Nwm A , et al. Efficient killing of tumor cells by CAR-T cells demands engagement of a larger number of CARs as opposed to TCRs.  2021.

[2] Johnson L R ,  Lee D Y ,  Eacret J S , et al. The immunostimulatory RNA RN7SL1 enables CAR-T cells to enhance autonomous and endogenous immune function. 2021.

[3] Biasco, L., Izotova, N., Rivat, C.,et al. Clonal expansion of T memory stem cells determines early anti-leukemic responses and long-term CAR T cell persistence in patients.2021.