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化学发光技术浅谈

2025-02-24
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一、什么是化学发光技术,原理是什么?


化学发光技术是近二、三十年来发展起来的一种测定方式。该技术的原理是利用化学反应释放的自由能激发中间体,使其从激发态回到基态。当中间体从激发态回到基态时会释放等能级的光子,对光子进行测定而进行定量分析。化学发光具有荧光的特异性,同时不需要激发光,避免了荧光分析中激发光杂散光的影响从而提高了灵敏度,并且避免了放射分析造成的环境污染和健康危害,是一种非常优秀的定量分析方法。

 

 二、化学发光技术的优势是什么?


1、简单性且可以完全自动化:化学发光作为一种分析工具的吸引之处就在于检测的简单性。由于化学发光的实质是自身发光,这意味着化学发光的分析测试仪器只需要提供一种可以检测光信号和纪录结果的方法就可以。

2、绝大多数的样品没有“背景”信号,如它们自身不发光。

 

三、化学发光反应的条件是什么?


化学发光反应的条件:能量、通道、荧光物质。

1、化学反应是放热反应。

2、必须形成存在电子激发态的通道。

3、激发态分子必须以辐射光子的形势回到基态,或将能量传递给荧光分子。

 

四、化学发光技术分类是什么?         

           

根据不同上午发光剂对该技术进行分类,可分为:间接化学发光、电化学发光、直接化学发光、光激化学发光。这些技术的最后表征都是光信号转化为电信号,并由计算机进行处理和换算得到实验结果。

间接化学发光的主要流程是是用酶进行标记抗原或抗体,标记复合物反应过程中加入底物也就是发光剂后,经催化和分解产生发光。间接化学发光的优势在于过程中作为标记物的酶基本不被消耗,发光信号强而稳定,且发光时间较长;检测方式简单、成本较低。

直接化学发光的主要流程是用压吖啶酯等标记物标记抗原或抗体,标记复合物反应过程中加入氧化剂过氧化氢和氢氧化钠形成碱性环境进行分解和发光。直接化学发光的优势在于试剂稳定性好,易于保存;标记物为小分子,对标记的抗原/抗体的空间位点几乎不造成影响;本底低,灵敏度好,结果稳定。

电化学发光主要流程是用电化学发光剂标记抗原或抗体,电化学反应过程中因电子产生转移而出现化学发光。电化学发光的优势在于可控的反应体系快速检测时间高精密度和高灵敏度宽广的检测范围。

 

五、化学发光反应的注意事项是什么?  

           

1、化学发光的检测不是一个比例测试,这是与荧光和吸收或比色测试不同的。

2、样品是浑浊的情况下有一部分杂光会进入到检测器。

3、需要注意的是检测器对光谱的敏感性近可能接近化学发光的光谱,以得到最大化的灵敏度。一般在自发光仪中的光电倍增管对蓝光有最佳的反应,对红光的末端光谱不太敏感。固态检测器对红光有较好的反应。

4、X光片广泛用于记录在尼龙膜、纤维素膜或PVDF膜上的化学发光印迹分析。但X光片仅能够用于检测紫外到蓝光光谱范围内的光信号。


化学发光
直接化学发光
间接化学发光
电化学发光

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