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竞争ELISA检测亲和力服务
竞争ELISA检测亲和力服务

竞争ELISA法是一种简便易行的亲和力测定方法。原理是抗体与不同浓度的抗原在水溶液中混合孵育达到平衡后,未结合的抗体被微孔板中包被的抗原捕获,并通过ELISA方法检测出来。目前,常用的检测亲和力的方法有很多,但其中大多数要么依赖昂贵的设备(表面等离子体共振),要么不普遍适用(荧光修饰、透析)或者需要修饰的抗原(放射性沉淀标记的抗原)。而竞争ELISA法测定亲和力则是例外,它仅依赖于少量纯化抗原和抗体即可进行亲和力的检测。

卡梅德科技(KMD Bioscience)致力于亲和力检测研究,能够给客户提供专业、有效的售前技术咨询和准确的数据支撑,为客户的实验项目提供强有力的保障。

竞争ELISA法原理

竞争法ELISA(也称抑制或封闭法ELISA)通过定量某种样品分析物对预计信号的干扰,来测定该分析物在样品中的含量。

抗原抗体的结合是一个可逆的反应:A+B ⇋AB(A表示抗体,B表示抗原,AB表示抗原抗体结合物)。当反应达到平衡时,解离常数Kd=[A][B]/[AB],[AB]表示反应平衡时抗原抗体结合物的浓度,[A]表示反应平衡时游离抗体的浓度,[B]表示反应平衡时游离抗原的浓度。

① 当反应体系中抗体很少,而抗原过量时,反应平衡后[AB]>[A];

② 当反应体系中抗原量很少,而抗体过量时,反应达到平衡后[AB]<[A];

③ 当反应体系中抗原抗体的量刚好合适时,反应达到平衡后处于半饱和状态,此时[AB]=[A],则Kd=[A][B]/[AB]=[B]。

在半饱和状态下,如果抗体的浓度很低,反应消耗的抗原很少,则反应后游离的抗原浓度[B]约等于总的抗原浓度[B]总,此时Kd=[B]≈[B]总。因此,只要在抗体浓度较低的情况下,找到可以在反应平衡后达到半饱和状态的抗原浓度[B]总,便可以得到解离常数。

竞争法的基本过程是选择少量的靶点分子和能够占据该靶点分子80%结合位点的标记的信号分子,加入梯度稀释的待测样品,将三者进行混合反应后检测靶点分子-信号分子复合物的信号值,绘制待测样品浓度和信号的剂量曲线,该曲线往往是反S型,得到IC50值,IC50越小,说明该待测样品和靶点分子的亲和力越强。

竞争ELISA原理示意图-卡梅德科技.jpg

技术特点

-- 无需样品处理,可检测原油或不纯的样品

-- 重复性好:重复样品和分析之间的差异更小

-- 灵活性高:可基于直接、间接或夹心ELISA

-- 更稳健:对样品稀释和样品基质效应的敏感性低于夹心ELISA

样品要求
客户提供要求

抗体,蛋白,多肽,化合物小分子等

* 缓冲液:PBS, HEPPS等不含有机试剂,不含Tris,甘油,咪唑,海藻糖,EDTA或DDT;
* 蛋白样品(含抗体):>200ug,浓度>0.5mg/ml,纯度>90%;
* 化合物小分子:1mg,浓度>1mg/ml,纯度>90%,溶于100%DMSO或者水中。


服务优势

--专业的技术团队和丰富的技术经验

--检测效率高,无需标记、实时监测

--先进的仪器设备

--应用范围广泛:可用于蛋白、核酸、多肽、纳米材料等分子互作分析

--提供真正的一站式服务:提供从亲和力测定服务,到分子互作研究的一体化解决方案

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