植物的遗传转化是指以植物器官、组织、细胞或原生质体作为受体，应用重组DNA技术，将外源基因导入植物基因组，以获得转基因植物的技术。目前应用最普遍的植物基因的遗传转化方法主要有农杆菌介导法和DNA直接转入法。

一．植物遗传转化常见方法

1.农杆菌介导法

农杆菌介导法是目前双子叶植物基因转移的常用方法。它利用根癌农杆菌的Ti质粒和发根农杆菌的Ri质粒上的一段T-DNA区在农杆菌侵染植物形成肿瘤的过程中，T-DNA区在农杆菌侵染植物形成肿瘤的过程中，T-DNA可被转移到植物细胞并插入到染色体基因中。从农杆菌转移到基因至植物细胞核基因组，是较理想的转化方法，该方法是当前研究最多、机理最清楚、技术方法最成熟的基因转化途径。农杆菌参与植物的遗传转化一般有3种常用方法，包括整株感染、叶盘法和原生质体法。

1.1 整株感染：一般采用种子实生苗或试管苗作为外植体，在整体植株上造成创伤，然后把农杆菌接种于创伤面上，或用针头把农杆菌注射到植物体内，使其进行侵染转化。这种方法转化成功率高，同时可以避开组织培养的过程，对于诱导再生困难的植株，是一条可以选择的途径。不足之处是转化细胞中常含未转化的细胞，筛选困难。

1.2 叶盘法：叶盘转化法拓宽了农杆菌感染转化外源基因的受体范围，可以直接利用植物的子叶、茎、芽、胚轴、未成熟胚，甚至成熟种子进行转化，是双子叶植物较为常用的简单有效的方法。

1.3 原生质体法：原生质体法是通过与植物原生质体融合与吞噬作用将外源基因导入植物细胞中。这种转化方法的优点为：得到的转化体一般不会是嵌合体，利用此种方法已使烟草属的多种植物，以及矮牵牛、胡萝卜、龙葵等细胞转化，并已获得转基因植株。

2. DNA直接转入法

DNA的直接转移是指利用植物细胞的生物学特性，通过物理化学法将外源基因转入受体植物细胞的技术。为了克服载体法的寄主局限性，如今已发展了基因枪法、点击法、花粉管通道法、显微注射法和PEG法等多种基因的直接转移技术，它们是单子叶植物及部分双子叶植物转化中常采用的基因转化法。

二．转化方法优缺点对照

三．实验关键

能否成功地获得转基因植物，取决于起始材料对农杆菌地感受性、对转化细胞形成地新生组织地选择能力以及中选组织地再生潜能。外植体对农杆菌地感受性由多种因素决定，最重要地有两个：

（1）外植体必须释放能诱导农杆菌vir基因的产物。vir基因位于农杆菌Ti质粒上，其中包含剪切T-DNA及将其以单链分子从细菌导入植物细胞和细胞核所必需的信息。（2）T-DNA链应能稳定地整合入植物基因组。多数双子叶植物对农杆菌地感受性不成其问题。

四．实验步骤

1. 获取目的基因：用限制酶切割下目的基因。

2. 基因表达载体的构建：将目的基因与载体（大多数选用质粒）用DNA连接酶连接起来。

3. 将目的基因导入受体细胞。将含有目的基因的重组质粒导入农杆菌（农杆菌为受体细胞）。

4. 目的基因的检测与坚定：用DNA分子杂交技术/分子杂交技术/抗原-抗体杂交技术/个体生物学水平鉴定等方法进行检验。

5. 最后将成功表达的细胞导入植物体内，对植物体进行个体生物学水平鉴定。

五．Ti质粒载体系统

卡梅德生物有着多年从事植物遗传转化的专业技术性团队，我们的植物遗传转化平台拥有有效的实验流程、专业的售前售后技术服务支持以及完善的分子生物学实验设备。植物遗传转化是将外源基因通过各种途径转到植物细胞中，而建立的转基因植株技术体系，目前较为常用的转化方法包括基因枪法、农杆菌介导转化法、病毒介导转化法和电击法等。这种改造植物的方法更有利于研究目的基因的耐盐碱、抗旱、抗寒以及抗病性。我们的科学家可根据客户的需求一对一的进行个性化方案定制，提供多种植物品种的瞬时转化和稳定转化服务，以满足客户的需求。