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scFv抗体文库构建服务
scFv抗体文库构建服务

scFv是由重链(VH)和轻链(VL)组成的小抗体片段,并通过一段短柔性肽连接,大小约为25kDa,是目前最常用的重组抗体类型。scFv体积小、特异性强、可在原核表达系统中大规模生产,且具有完整的抗原结合位点,广泛用于疾病的诊断与治疗。由于其体积小,在治疗疾病方面,更容易迅速穿透肿瘤;此外,scFv具有在非靶标组织中存留时间短、血清清除快的优点,使其在肿瘤造影方面有着巨大的应用潜力。常见的scFv抗体文库为噬菌体展示文库,此外,核糖体展示、酵母细胞展示、哺乳细胞展示和细菌展示等技术也可用于scFv文库的构建。

scFv抗体文库构建服务-卡梅德科技.png

卡梅德生物(KMD Bioscience)拥有成熟的scFv抗体文库构建体系,可制备关于免疫动物的脾细胞、人源B淋巴细胞的scFv抗体库。除此以外,我们会对scFv抗体序列信息进行全方面分析并用多种实验验证,如EC50测定,亲和力分析,流式阻断验证等。我们拥有包括M13、T4、T7和λ噬菌体在内的多种噬菌体展示平台,可满足客户的不同需要,提供个性化scFv文库构建服务。我们的研究人员拥有多年的文库构建经验,擅长构建不同类型的scFv噬菌体展示文库,如免疫库、天然库、半合成库、合成库等。我们构建的scFv抗体库库容量庞大,且具有丰富多样性,可产生高亲和力的scFv抗体。我们已为国内外多所机构提供了针对细菌、病毒、毒素、受体和肿瘤抗原、多肽等的scFv抗体库构建服务。噬菌体抗体展示技术操作简单,实验周期短,且可通过哺乳动物表达系统大量表达所需的scFv。利用噬菌体展示系统制备的scFv重组抗体技术无需制备杂交瘤细胞,可直接将scFv基因克隆到所需的噬菌粒载体。

scFv抗体文库构建服务流程-卡梅德科技.png

我们善于将VH与VL用一段柔性肽连接,构建客户需要的scFv。我们可为客户提供包括pMECS、pComb3X和pCANTAB 5E等多种噬菌粒载体。我们有TG1大肠杆菌、 XL1-Blue和ER2738等菌种,经扩大培养后,可用于噬菌体侵染。我们构建的抗体库库容量庞大,可达10^9,具有较好的多样性且片段插入率高,有利于筛选出令客户满意的亲和力与特异性强的scFv抗体。我们还可根据客户需要,对筛选的scFv进行表达与纯化。除原核表达系统外,我们还有各种的抗体蛋白的真核表达系统,如哺乳动物细胞、酵母细胞、植物和昆虫细胞表达系统等,可为客户生产制备高质量scFv抗体。卡梅德生物将用心为客户提供全面的 scFv文库构建服务,以满足全球科学家的不同需求。

scFv抗体文库构建服务流程
步骤服务内容周期
组织RNA提取与反转录取小鼠脾脏、杂交瘤、人和兔BPMC等,提取RNA后进行反转录1天
VH和VL基因的扩增与回收以cDNA为模板,扩增VH和VL基因2天
scFv基因的拼接与扩增通过SOE-PCR,将VH和VL基因用linker连接,获得scFv基因片段,之后进行胶回收2天
酶切与连接将scFv基因与质粒酶切后,用T4 DNA连接酶连接2天
重组质粒的转化通过电转化或化学法转化,获得初级抗体库3天
scFv文库库容测定将文库滴定后计算文库大小2天
插入率测定及多样性测定用PCR检验插入率;挑取单克隆测序检验文库多样性1周


卡梅德生物可以提供
不同类型抗体库噬菌体载体宿主菌物种组织或细胞最大库容量
scFv免疫库pMECS、pComb3X和pCANTAB 5E等TG1大肠杆菌、 XL1-Blue和ER2738等人、鼠、兔、羊、牛等脾脏、PBMC、杂交瘤细胞1×10^9
scFv天然库
scFv半合成库
scFv合成库


scFv抗体文库构建服务优势

scFv抗体文库构建服务优势-卡梅德科技.png

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